5 × Neoscript çalt RT-qPCR Premix plus-UNG

Pişik belgisi: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR), bir basgançakly ters transkripsiýa we mukdar PCR (qRT-PCR) üçin amatly ýokary durnukly bir turba zond esasly garyndy.Astarlaryň we zondlaryň öňünden garylmagyny goldaýar we pes temperaturada uzak wagtlap saklanandan soň durnukly bolýar.Synag ediljek nusga, goşmaça turba açylmazdan / turba geçirmezden ulanylanda gönüden-göni goşup bolýar.Bu önüm komponentleri üpjün edýär, mysal üçin gyzgyn başlangyç DNK polimeraza, M-MLV, ýylylyk bilen işleýän urasil DNK glikozilaza (TS-UNG), RNase inhibitory, MgCl₂, dNTP-ler (dTTP ýerine dUTP bilen) we stabilizatorlar.Genetiki taýdan üýtgedilen çalt güýçlendirme ters transkriptaz we DNK polimeraza bilen PCR güýçlendirmesini 20-40 minudyň içinde tamamlap bolýar.Bu reagent, inhibitasiýa garşy güýçlendiriji fermentiň we UNG fermentiniň garyşyk fermentleri bilen qPCR üçin ýörite bufer ulanýar.Şol sebäpden, maksatly genleriň gowy güýçlendirilmegini alyp biler we PCR galyndylarynyň we aerozolyň hapalanmagy sebäpli dörän ýalňyş güýçlenmäniň öňüni alyp biler.Bu reagent amaly biosistemalar, Eppendorf, Bio-Rad we Roche ýaly öndürijileriň floresan mukdar PCR gurallarynyň köpüsine laýyk gelýär.

Komponent

1.25 × Neoscript çalt RTase / UNG garyndysy

2.5 × Neoscript çalt RT premiks buferi (dUTP)

Saklamak şertleri

Componentshli komponentleri uzak möhletli saklamak üçin -20 at we 3 aýa çenli 4 be saklamaly.Eremezden ozal, sentrifugany gowy garmaly.Frequygy-ýygydan doňdurmakdan gaça duruň.

qRT-PCR reaksiýa ulgamyny taýýarlamak

1) a. Astaryň soňky konsentrasiýasy adatça 0,2μM.Has gowy netijeler üçin başlangyç konsentrasiýasy 0,2-1μM aralygynda optimizirlenip bilner.Adatça, zondyň konsentrasiýasy 0,1-0.3μM aralygynda optimizirlenip bilner.

2) b. Çalt PCR prosedurasy ulanylanda, primerleriň we zondlaryň konsentrasiýasyny ýokarlandyrmak has güýçlendirme netijelerine getirip biler we gatnaşygy degişlilikde optimizirlenmeli.

3) Dürli nusgalarda inhibitoryň dürli görnüşleri we mazmuny we maksatly geniň göçürme sany bar.Nusga göwrümi hakyky ýagdaýa görä göz öňünde tutulmalydyr.Zerur bolsa, nusgany nukleuzsyz suw ýa-da TE Buffer bilen eritmeli.

Reaksiýa C.onditions

Hil barlagy

1.Funksiýany kesgitlemek: qPCR duýgurlygy, aýratynlygy we gaýtalanmagy.

2.Ekzogen ýadro işjeňligi ýok: ekzogen endonukleý we ekzonukleýiň hapalanmagy ýok.

Bellikler

1.Çalt DNK polimerazynyň güýçlendiriş tizligi 1kb / 10-dan az bolmaly däldir.Dürli PCR gurallarynyň dürli ýyladyş we sowadyş tizligi, temperatura gözegçilik rejeleri we ýylylyk geçirijiligi bar, şeýlelik bilen, çalt PCR guralyňyz bilen bilelikde başlangyç / zond konsentrasiýasyny we işleýiş usulyny optimizirlemek zerurdyr.

2.Bu önüm giňden ulanylýar we ýokary duýgurly molekulýar diagnoz üçin amatly.Üç basgançakly PCR usuly pes gyzdyryjy temperaturaly primerlere ýa-da 200 at güýjünden uzyn bölekleri güýçlendirmek üçin maslahat berilýär.

3.Dürli amplikonlaryň DUTP-den peýdalanmagyň dürli netijeliligi we UNG-e dürli duýgurlygy sebäpli, UNG ulgamyny ulananyňyzda ýüze çykaryş duýgurlygy peselse, reagentleri optimizirlemeli.Gerek bolsa tehniki goldaw üçin biziň bilen habarlaşmagyňyzy haýyş edýäris.

4.PCR önümleriniň daşalmagynyň öňüni almak üçin güýçlendirmek üçin ýörite synag meýdançasy we turbageçiriji zerur.Ellikler bilen işlediň we ýygy-ýygydan üýtgediň we güýçlendirilenden soň PCR turbasyny açmaň.