CHO HCP ELISA toplumy
Bu analizde bir basgançakly immunosorbent ELISA usuly ulanylýar.CHOK1 HCP-ni öz içine alýan nusgalar, bir wagtyň özünde ELISA plastinkasynda örtülen HRP belgili geçi anti-CHOK1 antikor we CHOK1 antikor bilen reaksiýa berýär, ahyrsoňy gaty fazaly antikor-HCP belgili antikoryň sandwiç toplumyny emele getirýär.Çekilmedik antigen-antikor ELISA tabagyny ýuwup aýrylyp bilner.TMB substraty ýeterlik reaksiýa üçin guýa goşulýar.Stop çözgüdi goşulandan soň reňkiň ösüşi togtadylýar we 450 / 650nm reaksiýa ergininiň OD ýa-da siňdiriş bahasy mikroplat okyjy bilen okalýar.OD bahasy ýa-da siňdiriş bahasy ergindäki HCP mazmunyna proporsionaldyr.Mundan, ergindäki HCP konsentrasiýasy adaty egrä görä hasaplanyp bilner.
Arza
Bu toplum, nusgalarda CHOK1 öýjükli belok galyndylarynyň mukdaryny mukdar taýdan kesgitlemek üçin ulanylýar.
Ckomponentleri
| S / N. | Komponent | Konsentrasiýa | Saklamak şertleri |
| 1 | CHOK1 HCP standarty | 0,5mg / ml | ≤ - 20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5mg / ml | ≤ - 20 ℃, ýagtylykdan goraň |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, ýagtylykdan goraň |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Çözüwini bes ediň | NA | RT |
| 6 | Mikroplat möhürleýjiler | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Adokarky adsorbsion örtük plitalary | NA | 2-8 ℃ |
Enjamlar gerek
| Sarp edilýän zatlar / enjamlar | Önümçilik | Katalog |
| Mikroplat okyjy | Molekulýar enjamlar | Spektra Maks M5, M5e ýa-da şoňa deň |
| Termomikser | Eppendorf | Eppendorf / 5355 ýa-da şoňa deň |
| Worteks mikser | IKA | MS3 Sanly ýa-da şoňa meňzeş |
Saklamak we durnuklylyk
1.Ulag -25 ~ -15 ° C.
2.Saklamak şertleri 1-nji tablisada görkezilişi ýaly;1-2 komponentleri ≤ - 20 ° C, 5-6 RT, 3 stored saklanýar4、7、8 2-8 at aralygynda saklanýar;hereket ediş möhleti 12 aý.
Önümiň parametrleri
1.Duýgurlyk: 1ng / ml
2.Ectionüze çykarmak aralygy: 3- 100ng / ml
3.Takyklyk: Içerki analiz CV≤ 10%, aralyk CV≤ 15%
4.HCP gurşawy:> 80%
5.Aýratynlygy: Bu toplum, arassalama prosesine garaşsyz CHOK1 HCP bilen aýratyn reaksiýa berýänligi üçin ähliumumydyr.
Reagent taýýarlygy
1.PBST 0.05%
DdH-de suwuklandyrylan 20 ml PBST 0.05% 15 ml alyň2O, 300 ml çenli düzdi.
2.1.0% BSA
Çüýşeden 1g BSA alyň we 100 ml PBST 0,05% garyşdyryň, doly erýänçä gowy garmaly we 2-8 ° C derejesinde saklaň.Taýýarlanan eritme buferi 7 gün işleýär.Zerur bolanda taýýarlanmak maslahat berilýär.
3.Ectionüze çykarmak çözgüdi 2μg / mL
0,5 mg / mL Anti-CHO HCP-HRP-den 48μL alyň we 2μg / mL kesgitleýiş ergininiň iň soňky konsentrasiýasyny almak üçin 1% BSA-nyň 11,952μL-de suwuklaň.
4.QC we CHOK1 HCP ülňülerini taýýarlamak
| Tube No.ok. | Asyl | Konsentrasiýa | Ses | 1% BSA | jemi | Jemleýji |
| A | Standart | 0,5mg / ml | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tablisa: QC we ülňüleri taýýarlamak
Derňew tertibi
1.Reagentleri ýokardaky “Reagent taýýarlygy” -da görkezilişi ýaly taýýarlaň.
2.Her guýynyň içine 50μL ülňüleri, nusgalary we QC-leri alyň (3-nji tablisa serediň), soňra 100μL kesgitleme erginini goşuň (2μg / mL);Tabagy möhürleýji bilen örtüň we ELISA plastinkasyny termikserde goýuň.500rpm, 25 ± 3 at 2 sagatlap inkubasiýa ediň.
3.Mikroplaty legeniň içine öwüriň we örtük erginini taşlaň.ELISA plastinkasyny ýuwmak we ergini taşlamak we ýuwmagy 3 gezek gaýtalamak üçin her guýynyň içine 300μL PBST turbasy 0,05%.Tabagy arassa kagyz polotensasyna öwüriň we guradyň.
4.Her guýa 100μLTMB substrat goşuň (1-nji tablisa serediň), ELISA plastinkasyny möhürläň we 25 ± 3 at garaňkyda 15 minut inkubasiýa ediň.
5.Her guýynyň içine 100μL stop çözgüdi.
6.Mikroplat okaýjy bilen 450 / 650nm tolkun uzynlygynda siňdirişi ölçäň.
7.SoftMax ýa-da şoňa meňzeş programma üpjünçiligi arkaly maglumatlary derňäň.Dört parametrli logistik regressiýa modelini ulanyp, standart egrini ýerleşdiriň.
Adaty egrilik mysaly
ÜNS BERI .: HCP-iň konsentrasiýasy adaty egriniň ýokary çäginden ýokary bolsa, synagdan ozal eritme buferi bilen dogry suwarmaly.
Bellikler
Durmagyň çözgüdi 2M kükürt kislotasy, pyrlamazlyk üçin seresap boluň!
