PNGase F.
Peptid-N-glikozidaz F (PNGase F) glikoproteinlerden N bilen baglanyşykly oligosakkaridleriň hemmesini diýen ýaly aýyrmak üçin iň täsirli ferment usulydyr.PNGase F, iň köp GlcNAc bilen ýokary mannozyň, gibridiň we N bilen baglanyşykly glikoproteinlerden çylşyrymly oligosakkaridleriň içki GlcNAc we asparagin galyndylarynyň arasynda bölünýän amidazdyr.
Arza
Bu ferment uglewod galyndylaryny beloklardan aýyrmak üçin peýdalydyr.
Taýýarlyk we spesifikasiýa
| Daş görnüşi | Reňksiz suwuklyk |
| Beloklaryň arassalygy | ≥95% (SDS-PAGE-den) |
| Iş | 00500,000 U / mL |
| Ekzoglikozidaza | Hiç hili işjeňlik tapylmady (ND) |
| Endoglikozidaza F1 | ND |
| Endoglikozidaza F2 | ND |
| Endoglikozidaza F3 | ND |
| Endoglikozidaza H. | ND |
| Proteaz | ND |
Sypatlar
| EC belgisi | 3.5.1.52(Mikroorganizmlerden rekombinant) |
| Molekulýar agram | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| Izoelektrik nokady | 8. 14 |
| Iň amatly pH | 7.0-8.0 |
| Iň amatly temperatura | 65 ° C. |
| Substrat aýratynlygy | GlcNAc bilen asparagin galyndylarynyň arasynda glikozid baglanyşyklaryny arassalamak 1-nji surat |
| Tanaýyş sahypalary | Baglanan glikanlar, α1-3 fukoza bolmasa 2-nji surat |
| Aktiwatorlar | DTT |
| Inhibitor | SDS |
| Saklaýyş temperaturasy | -25 ~ -15 ℃ |
| Atylylyk hereketsizligi | 1µL PNGase F bolan 20µL reaksiýa garyndysy, 75 ° C-de 10 minutlap inkubasiýa bilen hereketsiz galýar. |
1-nji surat PNGase F-nyň substrat aýratynlygy
2-nji surat PNGase F.
Içki GlcNAc galyndylary α1-3 fukoza bilen baglanyşanda, PNGase F glikoproteinlerden N bilen baglanyşykly oligosakkaridleri aýryp bilmeýär.Bu üýtgetme ösümliklerde we käbir mör-möjek glikoproteinlerinde bolýar.
Ckomponentleri
|
| Komponentler | Konsentrasiýa |
| 1 | PNGase F. | 50 µl |
| 2 | 10 × Glikoprotein denatirleme buferi | 1000 µl |
| 3 | 10 × GlycoBuffer 2 | 1000 µl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 µl |
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik (U), 10 µg denatirlenen RNase B-den uglewodyň 95% -ini aýyrmak üçin zerur bolan ferment mukdary hökmünde kesgitlenýär, umumy reaksiýa mukdary 10 µL.
Reaksiýa şertleri
1.Glikoproteini 1-20 µg deionizirlenen suw bilen erediň, umumy reaksiýanyň mukdaryny 10 µl etmek üçin 1 µl 10 × Glikoprotein denatirleme buferi we H2O goşuň (zerur bolsa).
2.100 ° C-de 10 minut inkubasiýa ediň, buzda sowadyň.
3.2 µl 10 × GlycoBuffer 2, 2 µl 10% NP-40 goşuň we garmaly.
4.1-2 µl PNGase F we H goşuň2O (zerur bolsa) umumy reaksiýanyň göwrümini 20 µl etmek we garyşdyrmak.
5.37 minutda inkubat reaksiýasy 60 minut.
6.SDS-PAGE derňewi ýa-da HPLC derňewi üçin.
