Temperatura duýgur UNG
Temperatura duýgur UNG (TS-UNG) E. coli-de rekombinant aňlatma arkaly alynýar.Ferment, bir we iki hatar DNK-dan erkin urasiliň bölünip çykmagyny katalizleýär we RNK-a garşy hereketsizdir.E. coli geniniň adaty UNG fermenti bilen deňeşdirilende, TS-UNG fermenti pes temperaturada has ýokary işjeňlige eýe (20 ℃ ~ 37 ℃) we temperatura duýgur we aňsat hereketsiz (50 ℃), DUTP öz içine alýan güýçlendirijiniň zaýalanmagynyň öňüni alýar. adaty UNG fermentiniň hereketsizliginden soň galyp bilýän galyndy işjeňligi bilen otag temperaturasyndaky önümler.Şonuň üçin TS-UNG fermenti diňe PCR hapalanmagynyň öňüni almak reaksiýasy üçin däl, eýsem RT-PCR güýçlendirmek programmasy bilen hem gabat gelýär we RT-PCR hapalanmagynyň öňüni alyş reaksiýasynda ulanylyp bilner.
Maslahat berilýän anketa
Hapalanmagyň öňüni almak güýçlendirmek
Saklamak ýagdaýy
Uzak möhletli saklamak üçin -20 ° C, ulanmazdan ozal gowy garmaly, ýygy-ýygydan doňmakdan saklanmaly.
Saklaýyş buferi
20 m Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0,1 m EDTA, 1 mM DTT, stabilizator, 50% gliserol.
Bölüm kesgitlemesi
37 ° C-de 1 sagatda dU esaslaryny öz içine alýan 1µg bir hatar DNK-ny peseltmek üçin zerur ferment mukdary 1 iş birligi (U).
Hil barlagy
1.SDS-PAGE elektroforetiki arassalygy 98% -den uly
2.Pese gaçmak işjeňligi, partiýa-partiýa gözegçilik, durnuklylyk
3.Hiç hili ekzogen ýadro işjeňligi, ekzogen endonukleýz ýa-da ekzonukleýz hapalanmasy ýok.
Görkezmeler
| Komponentler | Ses (μL) | Ahyrky konsentrasiýa |
| 10 × PCR bufer (dNTP mugt, Mg²+mugt) | 5 | 1 × |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 MM |
| dUTP (dTTP çalşyň) | - | 200-600 MM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U / μL Taq | 0.25 | 1.25 U. |
| 1 U / μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0.5) | 0,5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Primer garyndysya | 2 | 1 × |
| Şablon | - | Μ 1μg / reaksiýa |
| ddH₂O | 50-ä çenli | - |
Bellik: a: qPCR / qRT-PCR üçin ulanylsa, reaksiýa ulgamyna floresan zond goşulmalydyr.Adatça, 0,2 μM jemleýji başlangyç konsentrasiýasy gowy netijeleri berip biler;reaksiýanyň öndürijiligi pes bolanda, başlangyç konsentrasiýasy 0,2-1 MM aralygynda sazlanyp bilner.Adatça, zondyň konsentrasiýasy 0,1-0,3 μM aralygynda optimallaşdyrylýar.Primer bilen zondyň iň gowy kombinasiýasyny tapmak üçin konsentrasiýa gradient synaglary geçirilip bilner.
Bellikler
1.TS-UNG fermentiniň optimal reaksiýa temperaturasy birneme pesdir we 20 ℃ ~ 37 range aralygynda optimallaşdyrylyp bilner, fermentiň dozasy we reaksiýa wagty 0,1 ~ 0.5 U, 5 ~ aralygynda optimizirlenip bilner. 10 min;we ferment ters transkripsiýa wagtynda hereketsiz bolup biler.
2.Hapalanmagynyň öňüni almak üçin PCR we RT-PCR üçin amatlydyr.
3.Frequygy-ýygydan doňdurmakdan gaça duruň we uly temperaturanyň üýtgemegine duçar bolmaň.
4.Güýçlendirilmeli dürli genler DUTP-iň dürli ulanylyş netijeliligine we UNG fermentine duýgurlygyna eýe, şonuň üçin UNG ulgamynyň ulanylmagy ýüze çykaryş duýgurlygynyň peselmegine sebäp bolsa, tehniki goldaw gerek bolsa, reaksiýa ulgamy sazlanmaly we optimizirlenmeli kompaniýamyz.
