Armyly başlangyç Bst 2.0 DNK polimeraza (Gliserol mugt)
Bst DNK polimeraza V2, 5 ′ → 3 ′ DNK polimeraza işjeňligi we zynjyry çalyşmak işjeňligi bolan Bacillus stearothermophilus DNA Polimeraza I-den alnan, ýöne 5 ′ → 3 ′ ekzonukleýasiýa işjeňligi ýok.Bst DNK Polimeraza V2 süýümleriň süýşmegi, izotermiki güýçlendirme LAMP (Loop mediated izotermiki güýçlendirme) we çalt yzygiderlilik üçin amatlydyr.Bst DNK polimeraza V2, tersine üýtgetmek tehnologiýasy arkaly alnan Bst DNK polimeraza V2 (HC5005A) esasly gyzgyn wersiýa, otag temperaturasynda DNK polimeraza işjeňligini saklap bilýär, şonuň üçin reaksiýa ulgamy işlenip we otag temperaturasynda emele gelmezligi üçin döredilip bilner. - ýörite güýçlendirmek we reaksiýanyň netijeliligini ýokarlandyrmak we bu wersiýa lyofilizasiýa edilip bilner.Mundan başga-da, işjeňligi ýokary temperaturada goýberilýär, şonuň üçin aýratyn işjeňleşdirme ädiminiň zerurlygy ýok.
Komponentler
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNK polimeraza V2 (Gliserolsyz) (8U / μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10 × HC Bst V2 bufer | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Goýmalar
1.LAMP izotermiki güýçlendirme
2.DNK zolakly ýekeje süýşme reaksiýasy
3.GCokary GC gen yzygiderliligi
4.Nanogram derejesiniň DNK yzygiderliligi.
Saklamak ýagdaýy
0 ° C-den pes transport we -25 ° C ~ -15 ° C derejesinde saklanar.
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik, 25 nmol dNTP-ni kislotanyň eräp bilmeýän materialyna 30 minutda 65 ° C-e goşýan fermentiň mukdary hökmünde kesgitlenýär.
Hil barlagy
1.Beloklaryň arassalygy barlagy (SDS-PAGE):Bst DNK polimeraza V2-iň arassalygy, Coomassie Blue kesgitlemesini ulanyp, SDS-PAGE derňewi bilen ≥99% kesgitlenýär.
2.EndonucleaseIş:Iň azyndan 8 U Bst DNK polimeraza V2 bolan 1 μg λDNA bilen 37 at-da inkubasiýa, 37 at-da 16 sagatlap inkubasiýa, kesgitlenişi ýaly kesgitlenýän bozulma getirmeýär.
3.Exonuclease işjeňligi:Iň azyndan 8 U Bst DNK polimeraza V2 bolan 1 μg λ -Hind Ⅲ DNK-ny 37 sagatda 16 Ⅲ siňdirýän 50 μL reaksiýanyň inkubasiýa edilişi ýaly kesgitlenýän bozulma ýüze çykmaýar.
4.Nikase işjeňligi:Iň azyndan 8 U Bst DNK polimeraza V2 bolan 1 μg pBR322 DNK bilen 37 ° C-de 16 sagatlap inkubasiýa, kesgitlenişi ýaly kesgitlenýän bozulma getirmeýär.
5.RNase işjeňligi:Iň azyndan 8 U Bst DNK polimeraza V2 bolan 1,6 μg MS2 RNA bilen 16 ° 37 ° C-de 16 sagatlap inkubasiýa, kesgitlenişi ýaly kesgitlenýän bozulma getirmeýär.
6.E. coliDNK:120 U Bst DNK polimeraza V2, E. coli 16S rRNA ýerleşýän ýeri üçin ýörite primerler bilen TaqMan qPCR ulanyp, E. coli genom DNK-nyň barlygy üçin barlanýar.E. coli genom DNK hapalanmagy ≤1 Göçürme.
Çyra reaksiýasy
| Komponentler | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 bufer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTP (hersi 10mM) | 3,5 μL |
| SYTO ™ 16 Greenaşyl (25 ×)a | 1.0 μL |
| Primer garyndysyb | 6 μL |
| Bst DNK polimeraza V2 (gliserolsyz) (8 U / uL) | 1 μL |
| Şablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL çenli |
Bellikler:
1) a.SYTOTM 16 Greenaşyl (25 ×): Tejribe zerurlyklaryna görä, beýleki boýaglar çalşyp biler;
2) b.Esasy garyndy: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB we beýleki göwrümleri garyşdyrmak arkaly alynýar.
Reaksiýa we ýagdaý
1 × HC Bst V2 bufer, inkubasiýa temperaturasy 60 ° C bilen 65 ° C arasynda.
Atylylyk hereketsizligi
80 ° C, 20min
