Bst 2.0 DNK polimeraza (Gliserol mugt)
Bst DNK polimeraza V2, 5 ′ → 3 ′ DNK polimeraza işjeňligi we zynjyry çalyşmak işjeňligi bolan Bacillus stearothermophilus DNA Polimeraza I-den alnan, ýöne 5 ′ → 3 ′ ekzonukleýasiýa işjeňligi ýok.Bst DNK Polimeraza V2 süýümleriň süýşmegi, izotermiki güýçlendirme LAMP (Loop mediated izotermiki güýçlendirme) we çalt yzygiderlilik üçin amatlydyr.
Komponentler
| Komponent | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymeraz V2 (Gliserolsyz) (8U / μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10 × HC Bst V2 bufer | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Goýmalar
1.LAMP izotermiki güýçlendirme
2.DNA zolakly ýekeje süýşme reaksiýasy
3.Gokary GC gen yzygiderliligi
4. Nanogram derejesiniň DNK yzygiderliligi.
Saklamak ýagdaýy
0 ° C-den pes transport we -25 ° C ~ -15 ° C derejesinde saklanar.
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik, 25 nmol dNTP-ni kislotanyň eräp bilmeýän materialyna 30 minutda 65 ° C-e goşýan fermentiň mukdary hökmünde kesgitlenýär.
Hil barlagy
1.Beloklaryň arassalygy barlagy (SDS-PAGE):Bst DNK polimeraza V2-iň arassalygy, Coomassie Blue kesgitlemesini ulanyp, SDS-PAGE derňewi bilen ≥99% kesgitlenýär.
2.Exonuclease işjeňligi:Iň azyndan 8 U Bst DNK polimeraza V2 bolan 1 μg λ -Hind Ⅲ DNK-ny 37 sagatda 16 Ⅲ siňdirýän 50 μL reaksiýanyň inkubasiýa edilişi ýaly kesgitlenýän bozulma ýüze çykmaýar.
3.Nikase işjeňligi:Iň azyndan 8 U Bst DNK polimeraza V2 bolan 1 μg pBR322 DNK bilen 37 ° C-de 16 sagatlap inkubasiýa, kesgitlenişi ýaly kesgitlenýän bozulma getirmeýär.
4.RNase işjeňligi:Iň azyndan 8 U Bst DNK polimeraza V2 bolan 1,6 μg MS2 RNA bilen 16 ° 37 ° C-de 16 sagatlap inkubasiýa, kesgitlenişi ýaly kesgitlenýän bozulma getirmeýär.
5.E. coli DNK:120 U Bst DNK polimeraza V2, E. coli 16S rRNA ýerleşýän ýeri üçin ýörite primerler bilen TaqMan qPCR ulanyp, E. coli genom DNK-nyň barlygy üçin barlanýar.E. coli genom DNK hapalanmagy ≤1 Göçürme.
Çyra reaksiýasy
| Komponentler | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 bufer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTP (hersi 10mM) | 3,5 μL |
| SYTO ™ 16 Greenaşyl (25 ×)a | 1.0 μL |
| Primer garyndysyb | 6 μL |
| Bst DNK polimeraza V2 (gliserolsyz) (8 U / uL) | 1 μL |
| Şablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL çenli |
Bellikler:
1) a.SYTOTM 16 Greenaşyl (25 ×): Tejribe zerurlyklaryna görä, beýleki boýaglar çalşyp biler;
2) b.Esasy garyndy: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB we beýleki göwrümleri garyşdyrmak arkaly alynýar.
Reaksiýa we ýagdaý
1 × HC Bst V2 bufer, inkubasiýa temperaturasy 60 ° C bilen 65 ° C arasynda.
Atylylyk hereketsizligi
80 ° C ， 20min
