DNase I (Rnase Free) (5u / ul)
Pişik belgisi: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I), bir ýa-da iki hatar DNK siňdirip bilýän endodeoksiribonukleýzdir.Monodoksynukleotidleri ýa-da 5 ýa-da terminalyndaky fosfat toparlary bilen bir ýa-da iki hatar oligodeoksynukleotidleri öndürmek üçin fosfodester baglanyşyklaryny ykrar edýär we ýapýar.DNase I-iň işjeňligi Ca baglydyr2+we Mn ýaly bölünen metal ionlary bilen işjeňleşdirilip bilner2+we Zn2+.5 m Ca2+fermentini gidrolizden goraýar.Mg2+ferment, DNK-nyň islendik setirinde tötänleýin tanap we ýapyp bilýärdi.Mn2+, DNK-nyň goşa zolaklary bir wagtyň özünde tanalýar we şol bir ýerde ýapylyp, tekiz DNK böleklerini ýa-da 1-2 sany nukleotid bilen ýapyk DNK böleklerini emele getirýär.
Komponentler
| Ady | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase mugt | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ml |
| 10 × DNase I bufer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 ml |
Saklamak şertleri
Saklamak üçin -25 ℃ ~ -15;;Buz paketleriniň aşagynda ulag.
Görkezmeler
1. Aşakda görkezilen nisbatlara görä RNase-den boş turbada reaksiýa çözgüdini taýýarlaň:
| Komponent | Ses |
| RNK | X µg |
| 10 × DNase I bufer | 1μL |
| DNase I, RNase-den erkin (5U / μL) | Rg RNA① üçin 1 U. |
| ddH2O | 10μL çenli |
Bellik: R RNK mukdaryna görä goşulmaly DNase I-iň göwrümini hasaplaň.
2. 37 15 15 minut üçin;
3. 2,5mM ~ 5mM iň soňky konsentrasiýasyna 0,5M EDTA goşuň we reaksiýany duruzmak üçin 65 at 10 minut gyzdyryň.Nusga ters transkripsiýa ýaly indiki reaksiýa üçin gönüden-göni ulanylyp bilnersynag.
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik, 1µg pBR322-ni doly peseldýän fermentiň mukdary hökmünde kesgitlenýärDNK 10 minutda 37 at.
Hil barlagy
RNase:37U-da 4 sagatlap 1,6µg MS2 RNA bilen 5U DNase I hiç hili pese gaçmaýaragarose gel elektroforezi bilen kesgitlenýär.
Bellikler
1. 0.5MEDTA özüňiz taýýarlaň.
2. RNK üçin 1U DNase I ulanyň.Şeýle-de bolsa, RNK 1µg-den az bolsa, 1U DNase I. ulanyň.
3. Fermenti iş wagtynda buzuň üstünde goýmagyňyzy haýyş edýäris.
