Superstart qPCR Premix plus-UNG
Pişik belgisi: HCB5071E
“Superstart qPCR Premix plus-UNG”, “Real Time PCR” hil we mukdar reaksiýalary üçin ýöriteleşdirilen reagent bolup, lyofilizasiýa prosesleri üçin ýörite işlenip düzülen gözleg esasynda kesgitlenýär.Onda “Hotstart Taq plus” (DG) atly täze ferment fermenti bar, ol Taq ferment işjeňligini otag temperaturasynda möhürleýär, pes temperatura şertlerinde deslapky anneal ýa-da primer dimer emele gelmegi sebäpli ýüze çykýan güýçlendirme täsirini netijeli saklaýar we şeýlelik bilen gowulaşýar. güýçlendirmek reaksiýasynyň aýratynlygy.Bu reagent, çalt gyzgyn işe başlamak üçin, qPCR reaksiýalarynyň netijeliligini we duýgurlygyny ep-esli ýokarlandyryp, optimallaşdyrylan qPCR ýörite bufer we UNG / dUTP hapalanma garşy ulgamy ulanýar.Köp mukdarda meýdanlarda gowy standart egrileri alyp we mukdary takyk ýerine ýetirip, galyndy PCR önümleri ýa-da aerozol hapalanmagy sebäpli ýüze çykýan ýalan polo positiveitel güýçlendirişiň öňüni alyp biler.Bu reagent amaly biosistemalar, Eppendorf, Bio-Rad we Roche we ş.m. öndürijilerden floresan mukdar PCR gurallarynyň köpüsine laýyk gelýär we lyofilizirlenen görnüşde gowy durnuklylygy görkezýär.
Reagent düzümi
1. 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+mugt) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 op lyoprotektant (islege görä)
Saklamak şertleri
Uzak möhletli ammar -20 at;4 at 3 aýa çenli saklap bolýar.Ulanylmazdan ozal gowy garmaly wegaýta doňmakdan we eremekden gaça duruň.
Tigir sürmek teswirnamasy
| Prosedura | Temp. | Wagt | Sikl |
| Iýmit siňdiriş | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Polimeraza işjeňleşdirme | 95 ℃ | 1 ~ 5 min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10 ~ 20 s | 40-50 |
| Annealing we giňeltmek | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR Suwuk reaksiýa Sybaldak taýýarlyk
|
Kompozisiýa |
25µL göwrüm |
50µL göwrüm |
Jemleýji konsentrasiýa |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG(Mg2+mugt) (DG) | 5µL | 10µL | 1 × |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4,5 mM |
| 4 × lyoprotektant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1 × |
| 25 × Primer-prob garyndysy2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| Şablon DNK3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL çenli | 50µL çenli | —— |
1. Astarlar üçin iň soňky konsentrasiýa 0,2μM adatça gowy netijeleri berýär;reaksiýanyň öndürijiligi pes bolanda, zerur bolanda 0,2-1μM aralygynda konsentrasiýany sazlaň.Synagyň konsentrasiýasy, optimal kombinasiýalary tapmak üçin gradient synaglary arkaly adatça 0,1-0.3μM aralygynda optimallaşdyrylýar.
2. Dürli şablonlardaky maksatly genleriň göçürme sany üýtgeýär;zerur bolsa, iň oňat şablon goşma mukdaryny kesgitlemek üçin gradient seýreklemek amala aşyrylyp bilner.
3. Bu ulgam lýofilizasiýa edilip bilner;müşderiler doňdurma-guratma talaplary bolmazdan bu ulgamy ulananlarynda, 4 × lyoprotektant saýlanyp bilner; doňan guradylan önümler bar bolsa, suwuk reagentleriň önüm öndürijiligini barlamak wagtynda, lyofilizlenen ulgam komponentleriniň yzygiderliligini üpjün etmek üçin 4 × lyoprotektant goşmaly; we täsirleri.
Ulgam ulanylandad doňdurmak üçin taýýarlaň ulgamy as aşakdakylar:
| Kompozisiýa | 25µL Reaksiýa ulgamy |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+mugt) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4 × lyoprotektant | 6.25µL |
| 25 × Primer-prob garyndysy | 1µL |
| ddH2O | 18 ~ 20µL çenli |
* Doňdurmak üçin beýleki ulgamlar zerur bolsa, aýratyn maslahatlaşyň.
Lýofilizasiýa prosesiss
| Prosedura | Temp. | Wagt | .Agdaý | Basyş |
| Öň doňdurma | 4 ℃ | 30 min | Saklaň |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Sowatmak | ||
| -50 ℃ | 180 min | Saklaň | ||
| Ilkinji guratmak | -30 ℃ | 60 min | Atingyladyş |
Ultimate vakuum |
| -30 ℃ | 70 min | Saklaň | ||
| Ikinji derejeli guratma | 25 ℃ | 60 min | Atingyladyş |
Ultimate vakuum |
| 25 ℃ | 300 min | Saklaň |
2. aboveokardaky lyofilizasiýa prosesi diňe salgylanmak üçin.Dürli önüm görnüşleri we dürli doňduryjy guradyjylaryň dürli parametrleri bar, şonuň üçin düzedişlere görä hakyky düzedişler girizilip bilnerulanylanda şertler.
3. Dürli lýofilizasiýa prosesleri dürli partiýa ululyklary üçin laýyk bolup bilerönümler, şonuň üçin uly göwrümli önümçilik üçin ulanylanda ýeterlik synag barlagy geçirilmelidir.
Lýofiliz ulanmak boýunça görkezmed poroşok
1. Lýofilizlenen poroşokdan gysga merkezden gaçyryş;
2. Lýofilizlenen poroşokda nuklein kislotasynyň şablonyny goşuň we 25µL çenli suw goşuň;
3. Merkezden gaçyryş usuly bilen gowy garmaly we enjamda işlediň.
Hil barlagy:
1. Funksional synag: duýgurlyk, aýratynlyk, qPCR-iň köpelmegi.
2. Ekzogen ýadro işjeňligi ýok, ekzogen endo / ekzonukleýz hapalanmasy ýok.
Tehniki maglumatlar:
1. “Superstart qPCR Premix plus-UNG” 1 ~ 5 minudyň içinde çalt gyzgyn başlamaga mümkinçilik berýän täze gyzgyn başlangyç fermentini ulanýar;ýörite bufer formulasy arkaly multiplex floresan mukdar PCR reaksiýalary üçin amatlydyr.
2. Has ýokary aýratynlygy bar, bu floresan mukdar PCR çäk kesgitlemesiniň duýgurlygyny ep-esli ýokarlandyrýar, güýçlendirme egrilerini kadalaşdyrýar, ýokary duýgurlyk floresan mukdar PCR kesgitleýji reagentleri ýaly pes konsentrasiýa şablonlarynda aç-açan gowulaşýar.
3. Has pes gyzdyryjy temperatura ýa-da 200bp-den köp bölekler üçin 3 basgançakly usul maslahat berilýär.
4. DUTP-den peýdalanmagyň netijeliligi we UNG fermentine duýgurlygy dürli maksatly genler üçin tapawutlanýar, şonuň üçin UNG ulgamyny ulanmak ýüze çykaryş duýgurlygynyň peselmegine sebäp bolsa, reaksiýa ulgamy sazlanmaly we optimizirlenmeli.Tehniki goldaw zerur bolsa, kompaniýamyz bilen habarlaşmagyňyzy haýyş edýäris.
5. Güýçlendirilmezden ozal we soň ýörite ýerleri we turbalary ulanyň, iş wagtynda ellik geýiň we ýygy-ýygydan çalşyň;PCR önümleri bilen nusgalaryň hapalanmagyny azaltmak üçin PCR gutarandan soň reaksiýa turbasyny açmaň.
