Proteinase K NGS (poroşok)
Pişik belgisi: HC4507A
NGS Protease K, ýokary ferment işjeňligi we giň substrat aýratynlygy bolan durnukly serin proteazydyr. Ferment, gidrofob aminokislotalaryň, kükürdi öz içine alýan aminokislotalaryň we terminaly aminokislotalaryň C terminalyna ýanaşyk ester baglanyşyklaryny we peptid baglanyşyklaryny ileri tutýar.Şeýlelik bilen, köplenç beloklary gysga peptidlere bölmek üçin ulanylýar.NGS Protease K, Asp bilen adaty serin proteizi39-Ol69-Ser224Serin proteizlerine mahsus bolan katalitik üçlük we katalitik merkezi Ca tow bilen gurşalan2+durnuklaşdyrmak üçin has giň şertlerde ýokary ferment işjeňligini saklamak üçin hökmany ýerler.
Spesifikasiýa
| Daş görnüşi | Ak-ak amorf poroşok, lyofilizlenen |
| Aýratyn işjeňlik | ≥40U / mg gaty |
| DNase | Hiç kim tapylmady |
| RNase | Hiç kim tapylmady |
| Bioburden | ≤50CFU / g gaty |
| Nuklein kislotasynyň galyndysy | <5pg / mg gaty |
Sypatlar
| Çeşme | Tritirachium albomy |
| EC belgisi | 3.4.21.64(Tritirachium albomyndan rekombinant) |
| Molekulýar agram | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Izoelektrik nokady | 7.81-nji surat |
| Iň amatly pH | 7.0-12.0 (Hemmesi ýokary işjeňligi ýerine ýetirýär) 2-nji surat |
| Iň amatly temperatura | 65 ℃ 3-nji surat |
| pH durnuklylygy | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16h) 4-nji surat |
| Malylylyk durnuklylygy | 50 aşakda (pH 8.0, 30min) 5-nji surat |
| Saklamak durnuklylygy | 12 aý üçin 25 at derejesinde saklanýar 6-njy surat |
| Aktiwatorlar | SDS, karbamid |
| Inhibitorlar | Diisopropil florofosfat;benzilsulfonil ftorid |
Saklamak şertleri
Lýofilizlenen tozy -25 ~ -15 at ýagtylykda uzak wagtlap saklaň;Olutionatyrylandan soň, ýagtylykdan 2-8 ℃ uzaklykda ýa-da ýagtylykdan -25 ~ -15 at uzaklykda uzak möhletli saklamak üçin degişli mukdarda alikot.
Çäreler
Ulanylanda ýa-da agram salanda gorag ellikleri we äýnek geýiň we ulanylandan soň gowy şemalladyň.Bu önüm deriniň allergiki täsirine we gözüň çynlakaý gyjyndyrylmagyna sebäp bolup biler.Dem alsa, allergiýa ýa-da demgysma alamatlaryna ýa-da demne sebäp bolup biler.Dem alyş ýollarynyň gyjyndyrylmagyna sebäp bolup biler.
Bölüm kesgitlemesi
NGS Protease K-nyň bir birligi, adaty kesgitlemek şertlerinde kazeini 1 μmol L-tirozine gidrolizlemek üçin zerur ferment mukdary hökmünde kesgitlenýär.
Reagentleri taýýarlamak
| Reagent | Öndüriji | Katalog |
| Kasein tehnikisüýt süýdünden | Sigma Aldrih | C7078 |
| NaOH | Sinofarm himikiReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | Sinofarm himikiReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinofarm himikiReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Trihloroasetik kislota | Sinofarm himikiReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| Natriý asetat | Sinofarm himikiReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| Sirke kislotasy | Sinofarm himikiReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Sinofarm himikiReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| Natriý karbonat | Sinofarm himikiReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Folin-fenol | Sangon Biotech (Şanhaý)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tirozin | Sigma | 93829 |
Reagent I:
Substrat: Iýmit süýdüniň ergininden 1% kazein: 1g süýtli kazeini 50ml 0,1M natriý fosfat ergininde, pH 8.0 eritmeli, suw wannasynda 65-70 ° C-de 15 minut gyzdyryň, garyşdyryň we erediň, suw bilen sowadyň, sazlaň natriý gidroksidi pH 8.0-a çenli, 100ml-e çenli eritmeli.
Reagent II:
TCA çözgüdi: 0,1M trihloroasetik kislota, 0,2M natriý asetat we 0,3M sirke kislotasy (agramy 1,64g trihloroasetik kislota + 1,64g natriý asetat + 1,724mL sirke kislotasy yzygiderli, 50mL deionizirlenen suw goşuň, HCl bilen pH 4.03 bilen sazlaň we eritmeli 100ml).
Reagent III:
0,4 m natriý karbonat ergini (agramy 4,24 gr suwuk natriý karbonat we 100mL suwda ereýär)
Reagent IV:
Folin fenol reagenti: deionizirlenen suw bilen 5 gezek garyşdyryň.
Reagent V:
Ferment garyndysy: 0,1 M natriý fosfat ergini, pH 8.0.
Reagent VI:
L-tirozin standart çözgüdi: 0, 0,005, 0.025, 0.05, 0.075, 0,1, 0,25 umol / ml L-tirozin 0,2M HCl bilen eritildi.
Prosedura
1. UV-Vis spektrofotometri açyň we fotometrik ölçegi saýlaň.
2. Tolkun uzynlygyny 660nm edip düzüň.
3. Suw wannasyny açyň, temperaturany 37 set edip düzüň, temperaturanyň 3-5 minut üýtgemezligini üpjün ediň.
4. 2m sentrifuga turbasynda 0,5mL substraty 37 minutlyk suw wannasynda 10 minut gyzdyryň.
5. 0,5mL suwuklandyrylan ferment erginini gyzdyrylan sentrifuga turbasyna 10 minut çykaryň.Ferment suwuklygyny boş topar hökmünde düzüň.
6. Reaksiýadan soň derrew 1,0 ml TCA reagentini goşuň.Gowy garyşdyryň we 30 minut suw wannasynda goýuň.
7. Merkezden gaçyryş reaksiýasy.
8. Aşakdaky bölekleri görkezilen tertipde goşuň.
| Reagent | Ses |
| Adatdan daşary | 0,5 ml |
| 0.4M Natriý karbonat | 2,5 ml |
| Folin fenol reagenti | 0,5 ml |
9. Suw wannasynda 37 30 30 minut goýmazdan ozal gowy garmaly.
10. OD660OD hökmünde kesgitlenildi1;boş dolandyryş topary: OD-ni kesgitlemek üçin ferment erginini çalyşmak üçin ferment ergini ulanylýar660OD hökmünde2, ΔOD = OD1-OD2.
11. L-tirozin standart egrisi: 0,5mL dürli konsentrasiýa L-tirozin ergini, 2,5mL 0,4M Natriý karbonat, 5mL sentrifuga turbasynda 0,5mL Folin fenol reagenti, 37 in 30 minut üçin inkubasiýa, OD-ni anyklaň660L-tiroziniň dürli konsentrasiýasy üçin, soňra Y = kX + b adaty egrini aldy, bu ýerde Y L-tiroziniň konsentrasiýasy, X OD600.
Hasaplama
2: Reaksiýa ergininiň umumy mukdary (mL)
0.5: Ferment ergininiň mukdary (mL)
0.5: Hromogen kesgitlemekde ulanylýan reaksiýa suwuklygy (mL)
10: Reaksiýa wagty (min)
Df: Köpeltmek
C: Fermentleriň konsentrasiýasy (mg / mL)
Sanlar
1-nji surat DNK galyndysy
| Mysal | Aw C4 | Nuklein kislotasy Dikeldiş (pg / mg) | Dikeldiş (%) | Jemi ýadro Kislota ( pg / mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK + STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNK-dan erkin H2O | Kesgitlenmedik | - | - | - |
2-nji surat
3-nji surat
4-nji pH durnuklylygy
5-nji surat
6-njy surat
