Wildabany Taq DNK polimeraza
Taq DNA polimeraza, 5 ′ → 3 ′ polimeraza we 5´ flap endonukleýz işjeňligine eýe bolan Termus suw howasy YT-1-den termostable DNK polimeraza.
Komponentler
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Tak Bufer | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| Taq DNK polimeraza (5 U / μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Saklamak ýagdaýy
0 ° C-den pes transport we -25 ° C ~ -15 ° C derejesinde saklanar.
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik, 15 nmol dNTP-ni kislotanyň eräp bilmeýän materialyna 30 minutda 75 ° C-e goşýan fermentiň mukdary hökmünde kesgitlenýär.
Hil barlagy
1.Beloklaryň arassalygy barlagy (SDS-PAGE):Taq DNK polimerazynyň arassalygy SDS-PAGE derňewi bilen ≥95% kesgitlenildi.
2.Endişjeňlik:Iň azyndan 5 U Taq DNK polimerazasy, 1 μg λDNA bilen 16 at 37 sagatda 37 atda kesgitlenýär.
3.Exonuclease işjeňligi:Iň azyndan 5 U Taq DNK polimerazasy, 1 μg λ -Hind Ⅲ siňdirýän DNK-ny 37 at 16 sagatda kesgitleýär, kesgitlenişi ýaly hiç hili bozulma ýüze çykmaýar.
4.Nikase işjeňligi:Iň azyndan 5 U Taq DNK polimerazasy, 1 μg pBR322 DNK bilen 37 ° C-de 16 sagatlap 16 sagatlap kesgitlenip bilinjek bozulma ýüze çykmaýar.
5.RNase işjeňligi:Iň azyndan 5 U Taq DNK polimerazasy, 1,6 μg MS2 RNA bilen 16 ° 37 ° C-de 16 sagatlap kesgitlenip bilinýän bozulmalara sebäp bolmaýar.
6.E. coliDNK:5 U Taq DNK polimerazasy, E. coli 16S rRNA ýerleşýän ýeri üçin ýörite primerler bilen TaqMan qPCR ulanyp, E. coli genom DNK-nyň barlygy üçin barlanýar.E. coli genom DNK hapalanmagy ≤1 Göçürme.
7.PCR güýçlendirmek (5.0 kb Lambda DNK)- 25 aýlaw PCR güýçlendirmek üçin 5 birlik Taq DNK polimerazasy bilen 5 ng Lambda DNK-ny öz içine alýan 50 µL reaksiýa garaşylýan 5.0 kb önümiň netijesini berýär.
Reaksiýa gurmak
| Komponentler | Ses |
| Şablon DNKa | islege bagly |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM ters primer | 1 μL |
| dNTP garyndysy (hersi 10mM) | 1 μL |
| 10 × Tak Bufer | 5 μL |
| Taq DNK polimerazab | 0,25 μL |
| Ucadrosyz suw | 50 μL çenli |
Bellikler:
1) Dürli şablonlaryň optimal reaksiýa konsentrasiýasy başga.Aşakdaky tablisada 50 µL reaksiýa ulgamynyň maslahat berilýän şablon ulanylyşy görkezilýär.
| DNK | Mukdary |
| Genom | 1 ng-1 μg |
| Plazmid ýa-da Wirus | 1 pg-1 ng |
2) Taq DNK polimerazynyň optimal konsentrasiýasy ýöriteleşdirilen programmalarda 0,25 µL ~ 1 µL aralygynda bolup biler.
ReaksiýaMaksatnama
| Stepdim | Temperatura(° C.) | Wagt | Sikller |
| Başlangyç denaturasiýaa | 95 ℃ | 5min | - |
| Denaturasiýa | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 aýlaw |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Giňeldiş | 72 ℃ | 1kb / min | |
| Jemleýji giňeltme | 72 ℃ | 5min | - |
Bellikler:
1) Başlangyç denaturasiýa ýagdaýy güýçlendirme reaksiýalarynyň köpüsi üçin amatly we şablon gurluşynyň çylşyrymlylygyna görä üýtgedilip bilner.Şablon gurluşy çylşyrymly bolsa, başlangyç denatasiýa täsirini gowulandyrmak üçin denaturasiýadan öňki wagt 5-10 minuta çenli uzaldylyp bilner.
2) Düwürtme temperaturasy, asmanyň Tm bahasyndan 3 ~ 5 ℃ pes derejede kesgitlenen primeriň Tm bahasyna görä sazlanmalydyr;Çylşyrymly şablonlar üçin, güýçli güýçlendirmek üçin gyzdyryjy temperaturany sazlamaly we uzaltma wagtyny uzaltmaly.
