2 × Sensi göni premiks-UNG (Probe qPCR)
Pişik belgisi: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) PCR-ni DNK çykarmazdan ýa-da nusga taýýarlamazdan gönüden-göni PCR ýerine ýetirmek üçin niýetlenendir.Bu reagent gyzgyn başlangyç DNK polimerazyndan, urasil DNK glikozilazasyndan (UNG), RNase inhibitory, MgCl-den ybarat2, dNTP-ler (dTTP ýerine dUTP bilen) we mukdar PCR (qPCR) üçin stabilizatorlar.Bu reagent ýokary inhibitory çydamlylygy öňe sürýär we şeýlelik bilen, DNK çykarmazdan bokurdak çişmesi, tüýkülik, gana garşy tutuş gan, plazma we serum ýaly nusgalary tapmak üçin gönüden-göni ulanylyp bilner.Reagent, anti-inhibitor DNK polimerazynyň we UNG fermentiniň garyşyk fermentleri bilen qPCR üçin eýeçilik buferini ulanýar.Şol sebäpden, ingibitorlary öz içine alýan nusgalarda maksatly genleriň gowy güýçlendirilmegini alyp biler we PCR galyndylarynyň we aerozolyň hapalanmagy sebäpli dörän ýalan polo positiveitel güýçlendirmäni saklap biler.Bu reagent amaly biosistemalar, Eppendorf, Bio-Rad, Roçe we ş.m. ýaly floresan mukdar PCR gurallarynyň köpüsine laýyk gelýär.
Komponentler
1. 50 × SensiDirect fermenti / UNG garyndysy
2. 2 × SensiDirect Premix buferi (dUTP)
Saklamak şertleri
Componentshli komponentleri uzak möhletli saklamak üçin -20 at we 3 aýa çenli 4 be saklamaly.Eremezden ozal, sentrifugany gowy garmaly.Frequygy-ýygydan doňdurmakdan gaça duruň.
Tigir sürmek teswirnamasy
| Stepdim | Temperatura | Wagt | Sikl |
| Iýmit siňdiriş | 50 ℃ | 2min | 1 |
| Polimeraza işjeňleşdirme | 95 ℃ | 1-5min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10-20-nji ýyllar | 40-50 |
| Annealing / Giňeldiş | 56-64 ℃ | 20-60s |
Geçiriji görkezmeler
| Reagent | Her göwrüm reaksiýa | Her reaksiýanyň göwrümi | Jemleýji konsentrasiýa |
| 2 × SensiDirect Premix buferi (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1 × |
| 50 × SensiDirect fermenti / UNG garyndysy | 0.5µL | 1µL | 1 × |
| 25 × Primer-prob garyndysy1, 2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| Mysal3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Jemi göwrüm | 25 μL | 50 μL | - |
1. Astaryň soňky konsentrasiýasy adatça 0,2μM.Has gowy netijeler üçin başlangyç konsentrasiýasy 0,2-1μM aralygynda optimizirlenip bilner.
2. Adatça, zondyň konsentrasiýasy 0,1-0.3μM aralygynda optimizirlenip bilner.Gözlegiň iň amatly konsentrasiýasy PCR güýçlendirme guralynyň hakyky wagty, gözlegiň görnüşi we floresan bellik ediji maddanyň görnüşi bilen baglanyşyklydyr.Gural gollanmasyna ýa-da her floresan zondyň aýratyn talaplaryna serediň.
3. Dürli nusgalarda inhibitoryň dürli görnüşleri we mazmuny we maksatly geniň göçürme sany bar.Nusga göwrümi hakyky ýagdaýa görä göz öňünde tutulmalydyr.Zerur bolsa, nukleuzsyz suw ýa-da TE Buffer goşup, nusgany eritmeli.
4. Dürli nusgalaryň maslahat berilýän göwrümi:
| Mysal | Biriniň göwrümi 50 μL reaksiýa | Maksimum gatnaşygy |
| Antikoagulýasiýa edilen ähli gan | 2,5 μL | 5% |
| Plazma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Bokurdak çalmak | 10 μL | 20% |
| Tüýkülik | 10 μL | 20% |
Hil barlagy
1. Funksiýany kesgitlemek: qPCR duýgurlygy, aýratynlygy we gaýtalanmagy.
2. Ekzogen ýadro işjeňligi ýok: ekzogen endonukleý we ekzonukleýiň hapalanmagy ýok.
Önümiň bellikleri
1. Bu önüm 1-5 minutda işjeňleşdirilip bilinýän gyzgyn başlangyç DNK polimerazynyň täze görnüşini ulanýar. Reaksiýa buferi optimizirlenensoň, gözleg usuly bilen goşa ýa-da köp floresan mukdar PCR üçin has amatlydyr.
2. PCR güýçlendirmegiň Rn bahasy gaty pes bolsa ýa-da güýçlendirme aç-açan päsgel berse, nusganyň mukdaryny azaltmak, reaksiýanyň göwrümini ýokarlandyrmak ýa-da nusganyň öňki eritmesi netijeleri gowulaşdyryp biler.
3. Ganyň, tüýküligiň, peşewiň, bokurdagyň çişmegi we ş.m. ýygnamak kliniki ölçeg talaplaryna laýyk gelmelidir we nuklein kislotasynyň zaýalanmagynyň öňüni almak üçin täze nusga ulanylyp bilner.
4. Dürli amplikonlaryň DUTP-de ulanylyş netijeliligi we UNG-e duýgurlygy dürli-dürli bolansoň, UNG ulgamyny ulananyňyzda ýüze çykaryş duýgurlygy peselse, reagentleri optimizirlemeli.Gerek bolsa tehniki goldaw üçin biziň bilen habarlaşmagyňyzy haýyş edýäris.
5. PCR önümlerini bir basgançakly reaksiýalaryň arasynda güýçlendirmezlik üçin güýçlendirmek üçin ýörite synag meýdançasy we turbageçiriji zerur.Ellikler bilen işlediň we ýygy-ýygydan üýtgediň we PCR güýçlendirilenden soň reaksiýa turbasyny açmaň.
