Proteinase K mNGS (suwuk)
Proteinase K, giň substrat aýratynlygy bolan durnukly serin proteazydyr.Theuwujy serişdeleriň barlygynda-da ene döwletdäki köp sanly belogy peseldýär.Kristal we molekulýar gurluş gözleglerinden alnan subutnamalar fermentiň işjeň katalitik üçlügi bolan subtilisin maşgalasyna degişlidigini görkezýär (Asp39-Ol69-Ser224).Açylýan ýerleriň aglaba bölegi, blokirlenen alfa amin toparlary bolan alifatiki we ysly aminokislotalaryň karboksil toparyna ýanaşyk peptid baglanyşygydyr.Köplenç giň aýratynlygy üçin ulanylýar.Bu proteinase K, mNGS üçin ýörite döredildi.Beýleki proteinase K bilen deňeşdirilende, aşaky mNGS amalyny has gowy üpjün edip biljek şol bir ferment öndürijiligi bilen has az nuklein kislotasynyň hapalanmagyny öz içine alýar.
Saklamak şertleri
2-8 2 2 ýyl
Spesifikasiýa
| Daş görnüşi | Reňksiz açyk goňur suwuklyk |
| Iş | ≥800 U / ml |
| Beloklaryň konsentrasiýasy | ≥20 mg / ml |
| Nikase | Hiç kim tapylmady |
| DNase | Hiç kim tapylmady |
| RNase | Hiç kim tapylmady |
Sypatlar
| EC belgisi | 3.4.21.64(Tritirachium albomyndan rekombinant) |
| Izoelektrik nokady | 7.81 |
| Iň amatly pH | 7.0- 12.0 1-nji surat |
| Iň amatly temperatura | 65 2 2-nji surat |
| pH durnuklylygy | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 sag) 3-nji surat |
| Malylylyk durnuklylygy | 50 aşakda (pH 8.0, 30 min) 4-nji surat |
| Saklamak durnuklylygy | 12 aýda 90% -den gowrak işjeňlik 25 at |
| Aktiwatorlar | SDS, karbamid |
| Inhibitorlar | Diisopropil florofosfat;fenilmetilsulfonil ftorid |
Goýmalar
1. Genetiki anyklaýyş toplumy
2. RNK we DNK çykarmak toplumlary
3. Dokumalardan belok däl komponentleri çykarmak, DNK ýaly belok hapalarynyň zaýalanmagysanjymlar we heparini taýýarlamak
4. Impulsly elektroforez bilen hromosoma DNK-ny taýýarlamak
5. Günbatar blot
6. Witro diagnozynda ferment glikozilleşdirilen albumin reagentleri
Çäreler
Ulanylanda ýa-da agram salanda gorag ellikleri we äýnek geýiň we ulanylandan soň gowy şemalladyň.Bu önüm deriniň allergiki täsirine we gözüň çynlakaý gyjyndyrylmagyna sebäp bolup biler.Dem alsa, allergiýa ýa-da demgysma alamatlaryna ýa-da demne sebäp bolup biler.Dem alyş ýollarynyň gyjyndyrylmagyna sebäp bolup biler.
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik (U) 1 mkol öndürmek üçin kazeini gidrolizlemek üçin zerur ferment mukdary hökmünde kesgitlenýäraşakdaky şertlerde minutda tirozin.
Reagentleri taýýarlamak
Reagent I: 1g süýt kazein 50ml 0,1M natriý fosfat ergininde (pH 8.0) eritildi, 65-70 ℃ suwda 15 minut inkubasiýa edildi, garyndy we erdi, suw bilen sowadyldy, natriý gidroksidi pH 8.0 bilen sazlandy we kesgitlenen göwrüm 100ml.
Reagent II: 0,1M trihloroasetik kislota, 0,2M natriý asetat, 0,3M sirke kislotasy.
Reagent III: 0.4M Na2CO3çözgüt.
Reagent IV: Forint reagenti arassa suw bilen 5 gezek seýreklenýär.
Reagent V: Ferment fermenti: 0,1M natriý fosfat ergini (pH 8.0).
Reagent VI: tirozin ergini: 0, 0,005, 0.025, 0.05, 0.075, 0,1, 0,25 umol / ml tirozin 0,2 bilen eritildiM HCl.
Prosedura
1. 0,5ml reagent I 37 to öňünden gyzdyrylýar, 0,5ml ferment erginini goşuň, gowy garmaly we inkubasiýa ediň37 10 10 minut üçin.
2. Reaksiýany duruzmak, gowy garmak we 30 minut inkubasiýa dowam etdirmek üçin 1ml reagent II goşuň.
3. Merkezden gaçyryş reaksiýasy.
4. 0,5ml adatdan daşary tebigaty alyň, 2,5ml reagent III, 0,5ml reagent IV goşuň, gowy garmaly we 37 at inkubasiýa ediň30 minut
5. OD660OD hökmünde kesgitlenildi1;boş dolandyryş topary: fermenti çalyşmak üçin 0,5ml reagent V ulanylýarOD kesgitlemek üçin çözgüt660OD hökmünde2, ΔOD = OD1-OD2.
6. L.660L-tiroziniň dürli konsentrasiýasy üçin, soňra Y = kX + b adaty egrini aldy, bu ýerde Y L-tiroziniň konsentrasiýasy, X OD600.
Hasaplama
2: Reaksiýa ergininiň umumy mukdary (mL)
0.5: Ferment ergininiň mukdary (mL)
0.5: Hromogen kesgitlemekde ulanylýan reaksiýa suwuklygy (mL)
10: Reaksiýa wagty (min)
Df: Köpeltmek
C: Fermentleriň konsentrasiýasy (mg / mL)
Salgylar
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biofiz.Res.Aragatnaşyk.(1971);44: 513.
3. Hilz, H.we ş.m..Ew.J. Biohim.(1975);56: 103-108.
4. Sambrook J.et al., Molekulýar klonlaşdyrma: Laboratoriýa gollanmasy, 2-nji neşir, Sowuk bahar portyLaboratoriýa metbugaty, Sowuk bahar porty (1989).
Sanlar
Şekil.1 Iň amatly pH
100mM bufer ergini: pH6.0-8.0, Na-fosfat;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glisin-NaOH.Enzimiň konsentrasiýasy: 1mg / ml
2-nji surat
20 mM K-fosfat bufer pH 8.0-de reaksiýa.Fermentleriň konsentrasiýasy: 1 mg / ml
3-nji surat Durnuklyk
25 ℃, 50 mM bufer ergini bilen 16 sagatda bejermek: pH 4.5- 5.5, asetat;pH 6.0-8.0, Na-fosfat;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0- 12.5, Glisin-NaOH.Fermentleriň konsentrasiýasy: 1 mg / ml
4-nji surat durnuklylygy
50 mM Tris-HCl buferi, pH 8.0 bilen 30 minutlyk bejermek.Fermentleriň konsentrasiýasy: 1 mg / ml
5-nji surat stabilility at 25 ℃
