Multiplex Bir ädim RT-qPCR Premix-UNG
Pişik belgisi: HCB5145A
Multiplex Bir ädim RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus), şablon hökmünde RNK esasly köp sanly PCR toplumy.Synag işinde tejribe işini ýönekeýleşdirýän we hapalanmak howpuny azaldýan şol bir turbada ters transkripsiýa we mukdar PCR geçirildi.Bu toplumda ilkinji simli cDNA ýylylyga çydamly Ters transkriptaz bilen netijeli sintez edildi we HotStart Tag DNA polimeraza tarapyndan mukdar taýdan güýçlendirildi.Toplumda esasan optimallaşdyrylan MP buferi, fermentleriň garyndysy we ş.m. bar. Bufer ergininde eýýäm Mg bar2+we dNTP.Mundan başga-da, güýçlendirme netijeliligini üpjün edip we köp güýçlendirme reaksiýasyny amala aşyryp bilýän, belli bir PCR güýçlendirilmegini netijeli saklap we birnäçe qPCR reaksiýasynyň güýçlendirme netijeliligini ýokarlandyryp biljek faktorlar goşulýar.Aerozolyň hapalanmagynyň öňüni almak üçin DUTP / UDG ulgamy goşuldy.
Komponentler
1. Bufer
2. Ferment garyndysy
Spesifikasiýa
| Gyzgyn başlangyç | Gurlan gyzgyn başlangyç |
| Ectionüze çykarmak usuly | Esasy gözleg |
| PCR usuly | Bir ädim RT-qPCR |
| Polimeraza | Tak DNK polimeraza |
| Nusganyň görnüşi | DNK |
Saklamak şertleri
Önüm gury buz bilen iberilýär we -25 ~ -15 at derejesinde 1 ýyl saklanyp bilner.Frequygy-ýygydan gaça durmalydyrdoňdurmaAýry-aýry saklamak maslahat berilýär.
Görkezmeler
1.Reaksiýa Ulgam
| Komponentler | Ses (μL) | Jemleýji konsentrasiýa |
| 2 × MP Bufer | 12.5 | 1 × |
| Ferment garyndysy | 1 | - |
| Primer / Probe garyndysy (2,5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Şablon RNK | 1-10 | - |
| RNase mugt H2O | 25-e çenli | - |
Bellikler:
Ulanylmazdan ozal gowy garyşmagy unutmaň, güýçli titremeden döreýän köpürjiklerden gaça duruň.
a.Esasy konsentrasiýa: ýagdaýyň optimal primer konsentrasiýasyna baglylykda, belki 0.l bilen 1.0μM aralygynda primer garyndysy.
b.Synagyň konsentrasiýasy: probagdaýyň optimal konsentrasiýasyna, belki 0.05 bilen 0,5μM aralygynda, multiplex zond belgileme tapawudynyň floresan toparyny goşmak bilen gözleg garyndysy.
c.Şablony seýreklemek: qPCR gaty duýgur we şablony eritmek maslahat berilýär.Dolandyryş Ct bahasy 20 bilen 35 aralygynda laýyk gelýär.
d.Ulgamy taýýarlamak: Ultra arassa iş stolunda we nukleaz galyndysy bolmadyk turbadan we reaksiýa turbasyndan taýýarlaň;ýaragyň kellesini süzgüç elementi bilen ulanmak maslahat berilýär.Haç hapalanmagyndan we aerozol hapalanmagyndan gaça duruň.
2. Optimal welosiped sürmekProtokol
| Sikl ädim | Temp. | Wagt | Sikller |
| Tersine transkripsiýa | 50 ℃a | 20 minut | 1 |
| Başlangyç denaturasiýa | 95 ℃ | 5min | 1 |
| Güýçlendirmek reaksiýasy | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Bellikler:
a.Tersine transkripsiýa: Temperatura 42 ° C ýa-da 50 ° C saýlap biler.
b.Güýçlendirme reaksiýasy: Temperatura dizaýn edilen desgalaryň Tm bahasyna görä sazlanýar.
c.Floresan signalyny almak: Synag amalyny gural gollanmasynyň talaplaryna laýyklykda düzmegiňizi haýyş edýäris.
Bellikler
Saglygyňyzy we howpsuzlygyňyzy üpjün etmek üçin laboratoriýa palto we ellik ýaly zerur PPE geýiň.
