BspQI
BspQI belli bir saýtlary tanap bilýän we aşagynda öndürilýän E. coli-de rekombinant görnüşde aňladylyp bilner
BspQI, IIs çäklendiriji endonukleýziň çäklendiriji endonukleýasy, Bacillus sferikusyndan klonlaşdyrylan we üýtgedilen BspQI genini göterýän rekombinant E. coli ştamyndan alnan.Aýratyn saýtlary tanap biler, tanamak yzygiderliligi we bölüniş sahypalary aşakdakylar:
5 '· · · · GCTCTTC (N) · · · · · · · · 3 ·'
3 '· · · · CGAGAAG (NNNN) · · · · 5'
Önüm aýratynlyklary
1. activityokary işjeňlik, çalt iýmitlenmek;
2. “Skalpel” ýaly takyk kesilmegini üpjün edýän pes ýyldyz işjeňligi;
3. BSA we haýwanlardan gelip çykýan erkin;
Metilizasiýa duýgurlygy
Dmetilizasiýa:Duýgur däl;
Dsm metilizasiýa:Duýgur däl;
CpG metilizasiýasy:Duýgur däl;
Saklamak şertleri
Haryt ≤ 0 be iberilmeli;-25 ~ - 15 at ýagdaýda saklaň.
Saklaýyş buferi
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 m ditiotreitol, 500 µg / ml Rekombinant Albumin, 0. 1% Trition X- 100 we 50% gliserol (pH 7.0 @ 25 ° C).
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik, 1µg Içerki gözegçilik DNK-ny 1 sagatda 50 ° C-de umumy reaksiýa göwrüminde 50 µL siňdirmek üçin zerur ferment mukdary hökmünde kesgitlenýär.
Hil barlagy
Beloklaryň arassalygy barlagy (SDS-PAGE):BspQI-iň arassalygy SDS-PAGE derňewi bilen ≥95% kesgitlenildi.
RNase:10U BspQI 1,6μg MS2 RNA bilen 4 sagat 50 at-da 4 sagatlap agarose gel elektroforezi bilen kesgitlenişi ýaly peselmeýär.
Aýratyn DNase işjeňligi:10U BspQI 1μg λ DNK bilen 50 at 16 sagatda, 1 sagat üçin 50 compared bilen deňeşdirilende, agarose gel elektroforezi bilen kesgitlenen artykmaç DNK bermeýär.
Kazyýet we kazyýet işi:10U BspQI bilen 1 μg λDNA siňdirilenden soň, DNK bölekleri 16ºC derejesinde T4 DNK ligasy bilen birleşdirilip bilner.Bu baglanan bölekleri BspQI bilen gaýtadan ulanyp bolýar.
E. coli DNK: E. coli 16s rDNA-a mahsus TaqMan qPCR tapylmagy, E.coli genomynyň galyndysynyň ≤ 0.1pg / uldygyny görkezdi.
Belok galyndysy:≤ 50 ppm
Bakterial Endotoksin: LAL-synag, Hytaýyň Pharmacopoeia IV 2020 neşirine görä, gel çäklendiriş synag usuly, umumy düzgün (1143).Bakterial endotoksin düzümi ≤10 EU / mg bolmaly.
Reaksiýa ulgamy we şertleri
| Komponent | Ses |
| BspQ I (10 U / μL) | 1 μL |
| DNK | 1 μg |
| 10 x BspQ I bufer | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL çenli |
Reaksiýa şertleri ： 50 ℃, 1 ~ 16 sag.
20 minutlyk ýylylyk hereketsizligi ： 80 ° C.
Maslahat berilýän reaksiýa ulgamy we şertleri fermentleriň iýmit siňdiriş effektini üpjün edip biler, bu diňe salgylanmak üçin, jikme-jiklikler üçin synag synaglaryna serediň.
Haryt amaly
Endonukleýiň siňdirilmegini çäklendirmek, Çalt klonlamak.
Bellikler
1. Reaksiýanyň göwrüminiň ≤ 1/10 fermentiniň göwrümi.
2. Gliserolyň konsentrasiýasy 5% -den köp bolanda ýyldyz işjeňligi ýüze çykyp biler.
3. Maslahat berilýän gatnaşygyndan aşaky substrat ýüze çykanda, ýaryş işjeňligi bolup biler.
