Syçanjygyň genotip toplumy

Pişik belgisi: HCR2021A

Bu önüm, DNK çig gazyp almak we PCR güýçlendirmek ulgamyny goşmak bilen, syçanyň genotiplerini çalt kesgitlemek üçin döredilen toplum.Önüm, Lizis Buffer we Proteinase k tarapyndan ýönekeý ýyrtylandan soň göni syçanjygyň guýrugyndan, gulagyndan, aýagyndan we beýleki dokumalaryndan PCR güýçlendirmek üçin ulanylyp bilner.Bir gijede iýmit siňdiriş, fenol-hloroform çykarmak ýa-da sütün arassalamak ýok, bu ýönekeý we synaglaryň wagtyny gysgaldýar.Önüm 2kb çenli maksat böleklerini güýçlendirmek we 3 jübüt primer bilen multiplex PCR reaksiýalary üçin amatly.2 × Syçan dokumasy göni PCR garyndysynda genetiki taýdan döredilen DNK polimeraza, Mg bar²⁺, DNK-lar we ýokary güýçlendirme netijeliligini we inhibitory çydamlylygy üpjün etmek üçin optimallaşdyrylan bufer ulgamy, PCR reaksiýalary şablon we primer goşmak we önümi 1 × rehidrasiýa etmek arkaly amala aşyrylyp bilner.Bu önüm bilen güýçlendirilen PCR önümi, 3 ′ ujunda görnükli “A” bazasyna eýedir we arassalanandan soň göni TA klonlaşdyrylmagy üçin ulanylyp bilner.

Komponentler

Saklamak şertleri

Önümler 2 ýyl -25 ~ -15 at derejesinde saklanmalydyr.Eremeden soň, Lizis Buferi gysga möhletli köp ulanmak üçin 2 ~ 8 at saklap bolýar we ulananyňyzda gowy garmaly.

Arza

Bu önüm syçanjygyň nokaut derňewi, transgeni kesgitlemek, genotip ýazmak we ş.m. üçin amatlydyr.

Aýratynlyklary

1.Pleönekeý operasiýa: genom DNK-ny çykarmagyň zerurlygy ýok;

2.Giňişleýin programma: dürli syçan dokumalaryny gönüden-göni güýçlendirmek üçin amatly.

Görkezmeler

1.Genomiki DNK-nyň çykmagy

1) Lizat taýýarlamak

Dokma lizaty lizlenmeli syçan nusgalarynyň sanyna görä taýýarlanýar (dokuma lizaty dozasyna görä ýerinde taýýarlanylmaly we ulanmak üçin gowy garylmaly) we ýekeje nusga üçin zerur bolan reagentleriň paýy aşakdaky ýalydyr:

2) Taýýarlyk we lizis

Dokumany ulanmak maslahat berilýär

Arassa merkezden gaçyryş turbalarynda syçanjygyň dokumalarynyň degişli mukdaryny alyň, her sentrifuga turbasyna 200μL täze dokuma lizat goşuň, worteks we silkäň, soňra 55 30 30 minut inkubasiýa ediň, soň bolsa 98 ℃ 3 minutda gyzdyryň.

3) Merkezden gaçyryş

Lizaty gowy we sentrifugany 12 minutda 5 minutda silkit.Adatdan daşary tebigat PCR güýçlendirmek üçin şablon hökmünde ulanylyp bilner.Şablon saklamak üçin zerur bolsa, adatdan daşary tebigaty başga bir steril sentrifuga turbasyna geçiriň we 2 hepde -20 at derejesinde saklaň.

2.PCR güýçlendirmek

2 × Syçan dokumasy göni PCR garyndysyny -20 from-den aýyryň we buzda eremeli, tersine garyşdyryň we aşakdaky tablisa laýyklykda PCR reaksiýa ulgamyny taýýarlaň (buzda işläň):

Bellik:

a) Goşulan mukdar ulgamyň 1/10 böleginden geçmeli däldir we gaty köp goşulsa, PCR güýçlendirilmegi päsgel berip biler.

Maslahat berilýän PCR şertleri

Bellik:

a) Annealing temperaturasy: Astaryň Tm bahasyna salgylanmak bilen, gyzdyryjy temperaturany primeriň kiçi Tm bahasyna + 3 ~ 5 to bellemek maslahat berilýär.

Umumy meseleler we çözgütler

1.Maksatly zolaklar ýok

1) Artykmaç liz önümi.Iň laýyk şablony saýlaň, adatça ulgamyň 1/10 böleginden köp bolmaly däl;

2) Örän uly nusga ölçegi.Lizaty 10 gezek garyşdyryň, soňra ulaldyň ýa-da nusganyň ululygyny azaldyň we gaýtadan lizläň;

3) Dokumanyň nusgalary täze däl.Täze dokuma nusgalaryny ulanmak maslahat berilýär;

4) Esasy hiliň pesligi.Astaryň hilini barlamak we deslapky dizaýny optimizirlemek üçin güýçlendirmek üçin genom DNK ulanyň.

2.Aýratyn däl güýçlendirme

1) Düwürtme temperaturasy gaty pes we aýlaw sany gaty köp.Anne temperaturasyny ýokarlandyrmak we siklleriň sanyny azaltmak;

2) Şablonyň konsentrasiýasy gaty ýokary.Şablonyň mukdaryny azaltmak ýa-da güýçlendirilenden soň şablony 10 gezek eritmek;

3) Esasy başlangyç aýratynlygy.Astar dizaýnyny optimizirläň.

Bellikler

1.Nusgalaryň arasynda haç hapalanmagynyň öňüni almak üçin birnäçe nusga alma gurallary taýýarlanylmaly we gurallaryň ýüzüni her gezek synagdan soň 2% natriý gipohlorit ergini ýa-da nuklein kislotasy arassalaýjy bilen arassalap bolýar.

2.Syçanjygyň täze dokumalaryny ulanmak maslahat berilýär we güýçlendiriş netijelerine täsir etmezlik üçin nusga almagyň göwrümi gaty uly bolmaly däldir.

3.Lizis Bufer ýygy-ýygydan doňdurmakdan saklanmalydyr we gysga möhletli köp ulanmak üçin 2 ~ 8 at derejesinde saklanyp bilner.Pes temperaturada saklansa, ýagyş bolup biler we ulanmazdan ozal doly eremeli.

4.PCR Mix ýygy-ýygydan doňdurmakdan saklanmalydyr we gysga möhletli ulanmak üçin 4 at derejesinde saklanyp bilner.

5.Bu önüm diňe ylmy synag synaglary üçin niýetlenendir we kliniki diagnozda ýa-da bejergide ulanylmaly däldir.