Rnase inhibitory (Gliserol mugt)
Murine RNase inhibitory, E.coli-den aňladylan we arassalanan rekombinant murin RNase inhibitorydyr.Kovalent däl baglanyşyk arkaly RNase A, B ýa-da C 1: 1 nisbatynda baglanyşýar, şeýlelik bilen üç fermentiň işjeňligini saklaýar we RNK-nyň zaýalanmagyndan goraýar.Şeýle-de bolsa, Aspergillusdan RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ýa-da RNase garşy täsirli däl.Murine RNase inhibitory RT-PCR, RT-qPCR we IVT mRNA tarapyndan synag edildi we dürli täjirçilik ters transkriptazlar, DNK polimerazalary we RNK polimerazalary bilen utgaşdy.
Adam RNase inhibitorlary bilen deňeşdirilende, murin RNase inhibitory, inhibitoryň hereketsizleşmegine sebäp bolýan okislenmä ýokary duýgur iki sistini öz içine almaýar.DTT-iň pes konsentrasiýalarynda durnukly etmek (1 m-den az).Bu aýratynlyk, DTT-iň ýokary konsentrasiýasy reaksiýa garşy bolan reaksiýalarda ulanmak üçin amatly edýär (mysal üçin Real-time RT-PCR).
Aýalbarmak
Bu önüm, RNase päsgelçiliginiň RNK zaýalanmagynyň öňüni alyp boljak islendik synagda giňden ulanylyp bilner:
1.Birinji hatar cDNA sintezi, RT-PCR, RT-qPCR we ş.m .;
2. In vitro transkripsiýasynda / terjimesinde RNK-dan goraň (mysal üçin vitro-da wirusyň köpelmegi);
3. RNK izolýasiýasy we arassalanmagy wagtynda RNase işjeňliginiň gadagan edilmegi.
Saklamak şertleri
-25 ～ -15 at saklaň;
Doňdurma siklleri ≤ 5 gezek;
1 ýyl
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik, 5 ng RNase A-nyň işjeňligini 50% saklamak üçin zerur bolan RNase Inhibitorynyň mukdary hökmünde kesgitlenýär.
Molekulýar agram
RNase inhibitory (gliserolsyz) 50 kDa belokdyr.
Hil barlagy
Exonuclease Iş:
40 μ fermentiň 1 μg λ-Hind III siňdiriji DNK bilen 37 ° C-de 16 sagatlap inkubasiýa edilmegi, gel elektroforezi bilen kesgitlenýän DNK-nyň hiç hili bozulmagyna getirmedi.
Endonukleýiň işi:
40 U fermentiň 1 μg λ DNK bilen 37 ° C-de 16 sagatlap inkubasiýa edilmegi, gel elektroforezi bilen kesgitlenýän DNK-nyň hiç hili bozulmagyna getirmedi.
Niklemek Iş:
40 μ fermentiň 1 μg pBR322 bilen 16 sagatda 37 at inkubasiýa edilmegi, gel elektroforezi bilen kesgitlenýän DNK-nyň hiç hili bozulmagyna getirmedi.
RNase Iş:
40 U fermentiň 1,6 μg MS2 RNA bilen 37 at 4 sagatlap inkubasiýa edilmegi, gel elektroforezi bilen kesgitlenýän RNK-nyň hiç hili bozulmagyna getirmedi.
E.coli DNK:
40 U ferment TaqMan qPCR tarapyndan kesgitlenýär.E.coli DNK ≤ 0. 1pg / 40U.
Notes
1. Fermentleriň hereketsizliginiň öňüni almak üçin sarsmaň ýa-da güýçli garyşdyrmaň.
2.RNase inhibitory 25 ℃ 55 temperatures aralygyndaky temperaturalarda işjeňdir we ≥65 at-da hereketsizdir.
3. RNase H, RNase 1 we RNase T1-iň işjeňligi päsgel bermeýär.
4. RNase işjeňligini saklamak üçin pH diapazony giňdir (pH 5-9-da işjeň), pH 7-8-de iň ýokary işjeňligi görkezýär.
