Proteinaz K (Suwuk)
Pişik belgisi: HC4502A
Proteinase K, giň substrat aýratynlygy bolan durnukly serin proteazydyr.Theuwujy serişdeleriň barlygynda-da ene döwletdäki köp sanly belogy peseldýär.Kristal we molekulýar gurluş gözleglerinden alnan subutnamalar fermentiň işjeň katalitik üçlügi bolan subtilisin maşgalasyna degişlidigini görkezýär (Asp39-Ol69- Ser224).Açylýan ýerleriň aglaba bölegi, blokirlenen alfa amin toparlary bolan alifatiki we ysly aminokislotalaryň karboksil toparyna ýanaşyk peptid baglanyşygydyr.Adatça giňligi üçin ulanylýaraýratynlygy.
Spesifikasiýa
| Daş görnüşi | Reňksiz açyk goňur suwuklyk |
| Iş | ≥800 U / ml |
| Beloklaryň konsentrasiýasy | ≥20 mg / ml |
| DNase | Hiç kim tapylmady |
| RNase | Hiç kim tapylmady |
Saklamak şertleri
2-8 temperature temperaturada saklaň.
Sypatlar
| EC belgisi | 3.4.21.64 (R.Tritirachium albomyndan ekombinant) |
| Molekulýar agram | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| Izoelektrik nokady | 7.81 |
| Iň amatly pH | 7.0-12.0 1-nji surat |
| Iň amatly temperatura | 65 2 2-nji surat |
| pH durnuklylygy | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16 sag) 3-nji surat |
| Malylylyk durnuklylygy | 50 aşakda (pH 8.0, 30 minut) 4-nji surat |
| Aktiwatorlar | SDS, karbamid |
| Inhibitorlar | Diisopropil florofosfat;fenilmetilsulfonil ftorid |
Goýmalar
1. Genetiki anyklaýyş toplumy
2. RNK we DNK çykarmak toplumlary
3. Dokumalardan belok däl komponentleri çykarmak, DNK sanjymlary we heparini taýýarlamak ýaly belok hapalarynyň zaýalanmagy
4. Impulsly elektroforez bilen hromosoma DNK-ny taýýarlamak
5. Günbatar blot
6. Witro diagnozynda ferment glikozilleşdirilen albumin reagentleri
Çäreler
Ulanylanda ýa-da agram salanda gorag ellikleri we äýnek geýiň we ulanylandan soň gowy şemalladyň.Bu önüm deriniň allergiki täsirine we gözüň çynlakaý gyjyndyrylmagyna sebäp bolup biler.Dem alsa, allergiýa ýa-da demgysma alamatlaryna ýa-da demne sebäp bolup biler.Dem alyş ýollarynyň gyjyndyrylmagyna sebäp bolup biler.
Derňew
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik (U) aşakdaky şertlerde minutda 1 olmol tirozini öndürmek üçin kazeini gidrolizlemek üçin zerur ferment mukdary hökmünde kesgitlenýär.
Reagentleri taýýarlamak
Reagent I: 1g süýt kazein 50ml 0,1M natriý fosfat ergininde (pH 8.0) eritildi, 65-70 ℃ suwda 15 minut inkubasiýa edildi, garyldy we erdi, suw bilen sowadyldy, natriý gidroksidi pH8.0 bilen sazlandy we kesgitlenildi göwrümi 100ml.
Reagent II: TCA ergini: 0,1M trihloroasetik kislota, 0,2M natriý asetat, 0,3M sirke kislotasy.
Reagent III: 0.4M Na2CO3çözgüt.
Reagent IV: Forint reagenti arassa suw bilen 5 gezek seýreklenýär.
Reagent V: Ferment fermenti: 0,1M natriý fosfat ergini (pH 8.0).
Reagent VI: Tirozin ergini: 0, 0,005, 0.025, 0.05, 0.075, 0,1, 0,25 umol / ml tirozin 0,2M HCl bilen eritildi.
Prosedura
1. 0,5ml reagent I 37 37 to öňünden gyzdyrylýar, 0,5ml ferment erginini goşuň, gowy garmaly we 37 min 10 minutda inkubasiýa ediň.
2. Reaksiýany duruzmak, gowy garmak we 30 minut inkubasiýa dowam etdirmek üçin 1ml reagent II goşuň.
3. Merkezden gaçyryş reaksiýasy.
4. 0,5ml adatdan daşary tebigaty alyň, 2,5ml reagent III, 0,5ml reagent IV goşuň, gowy garyşdyryň we 30 min üçin 37 at inkubasiýa ediň.
5. OD660OD hökmünde kesgitlenildi1;boş dolandyryş topary: OD-ni kesgitlemek üçin ferment erginini çalyşmak üçin 0,5ml reagent V ulanylýar660OD hökmünde2, ΔOD = OD1-OD2.
6. L.660L-tiroziniň dürli konsentrasiýasy üçin, soňra Y = kX + b adaty egrini aldy, bu ýerde Y L-tiroziniň konsentrasiýasy, X OD600.
Hasaplama
2: Reaksiýa ergininiň umumy mukdary (mL)
0.5: Ferment ergininiň mukdary (mL)
0.5: Hromogen kesgitlemekde ulanylýan reaksiýa suwuklygy (mL)
10: Reaksiýa wagty (min)
Df: Köpeltmek
C: Fermentleriň konsentrasiýasy (mg / mL)
Salgylar
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biofiz.Res.Aragatnaşyk.(1971);44: 513.
3. Hilz, H.we ş.m..Ew.J. Biohim.(1975);56: 103-108.
4. Sambrook J.et al., Molekulýar klonlaşdyrma: Laboratoriýa gollanmasy, 2-nji neşir, “Sowuk bahar porty” barlaghanasynyň metbugaty, “Sowuk bahar porty” (1989).
Sanlar
Şekil. 1 Iň amatly pH
100mM bufer ergini: pH6.0-8.0, Na-fosfat;pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glisin-NaOH.Enzimiň konsentrasiýasy: 1mg / ml
2-nji surat. Iň amatly temperatura
20mM K-fosfat bufer pH 8.0-de reaksiýa.Fermentleriň konsentrasiýasy: 1mg / ml
3-nji surat Durnuklyk
25 ℃, 50mM bufer ergini bilen 16 sagatda bejermek: pH 4.5-5.5, asetat;pH 6.0-8.0, Na-fosfat;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0-12.5, Glisin-NaOH.Fermentleriň konsentrasiýasy: 1mg / ml
4-nji surat durnuklylygy
50mM Tris-HCl buferi, pH 8.0 bilen 30 minutlyk bejergi.Fermentleriň konsentrasiýasy: 1mg / ml
5-nji surat stabilility at 25 ℃
