Urasil DNK glikozilaza
Urasil-DNK glikozilaza (UNG ýa-da UDG), molekulýar agramy 25 kDa bolan E.coliniň rekombinant klonydyr.Urasil saklaýan bir hatar we iki hatar DNK-dan erkin urasiliň bölünip çykmagyny katalizleýär we RNK-a garşy hereketsizdir we PCR güýçlendiriji önümleriniň hapalanmagynyň öňüni alyp biler.Hereket ýörelgesi, eger PCR reaksiýasynda dUTP dTTP bilen çalşylsa we dU esaslaryny öz içine alýan PCR güýçlendiriji önüm emele gelse, ferment bir basgançakly we iki hatar U bazalarynyň glikozid baglanyşygyny saýlap bozup biler. DNK we PCR güýçlendiriji önümini peseltmek.
Maslahat berilýän anketa
Hapalanmagyň öňüni almak güýçlendirmek
Saklamak ýagdaýy
Uzak möhletli saklamak üçin -20 ° C, ulanmazdan ozal gowy garmaly, ýygy-ýygydan doňmakdan saklanmaly.
Saklaýyş buferi
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizator, 50% gliserol.
Bölüm kesgitlemesi
37 ° C-de 1 sagatda dU esaslaryny öz içine alýan 1µg bir hatar DNK-ny peseltmek üçin zerur ferment mukdary 1 birlikdir.
Hil barlagy
1.SDS-PAGE elektroforetiki arassalygy 98% -den uly
2.Güýçlendirmek duýgurlygy, partiýa-partiýa gözegçilik, durnuklylyk
3.1U UNG 2 minut üçin 50 at bejerilenden soň, 103 nusgadan aşakda U bolan şablon düýbünden peselmeli we güýçlendiriji önüm öndürilip bilinmez.
4.Ekzogen ýadro işjeňligi ýok
Görkezmeler
| Komponentler | Ses (μL) | Ahyrky konsentrasiýa |
| 10 × PCR bufer (dNTP mugt, Mg²+mugt) | 5 | 1 × |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 MM |
| dUTP (dTTP çalşyň) | - | 200-600 MM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U / μL Taq | 0.25 | 1.25 U. |
| 5 U / μL UNG | 0,25 (0,1-0.5) | 0,25 U (0,1-0.5) |
| 25 × Primer garyndysya | 2 | 1 × |
| Şablon | - | Μ 1μg / reaksiýa |
| ddH₂O | 50-ä çenli | - |
Bellik: a: qPCR / qRT-PCR üçin ulanylsa, reaksiýa ulgamyna floresan zond goşulmalydyr.Adatça, 0,2 μM jemleýji başlangyç konsentrasiýasy gowy netijeleri berip biler;reaksiýanyň öndürijiligi pes bolanda, başlangyç konsentrasiýasy 0,2-1 MM aralygynda sazlanyp bilner.Adatça, zondyň konsentrasiýasy 0,1-0,3 μM aralygynda optimallaşdyrylýar.Primer bilen zondyň iň gowy kombinasiýasyny tapmak üçin konsentrasiýa gradient synaglary geçirilip bilner.
Bellikler
1.UNG fermenti, PCR güýçlendirme reaksiýasyndan öň hapalanan DUTP güýçlendiriji önümlerini reaksiýa ulgamyndan aýyrmak, soňra önümiň hapalanmagy sebäpli ýalan-oňyn netijelerden gaça durmak üçin ulanylyp bilner.
2.Hapalanmaga garşy PCR reaksiýasynda ulanmak üçin UNG fermentiniň iň amatly temperaturasy, 2 minut üçin 50 is;hereketsiz ýagdaý 5 minut üçin 95 is.
3.Frequygy-ýygydan doňdurmakdan gaça duruň we uly temperaturanyň üýtgemegine duçar bolmaň.
4.Güýçlendirilmeli dürli genler DUTP-iň dürli ulanylyş netijeliligine we UNG fermentine duýgurlygyna eýe, şonuň üçin UNG ulgamynyň ulanylmagy ýüze çykaryş duýgurlygynyň peselmegine sebäp bolsa, tehniki goldaw gerek bolsa, reaksiýa ulgamy sazlanmaly we optimizirlenmeli kompaniýamyz.
