Rnase inhibitory
Murine RNase inhibitory, E.coli-den aňladylan we arassalanan rekombinant murin RNase inhibitorydyr.Kovalent däl baglanyşyk arkaly RNase A, B ýa-da C 1: 1 nisbatynda baglanyşýar, şeýlelik bilen üç fermentiň işjeňligini saklaýar we RNK-nyň zaýalanmagyndan goraýar.Şeýle-de bolsa, Aspergillusdan RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ýa-da RNase garşy täsirli däl.Murine RNase inhibitory RT-PCR, RT-qPCR we IVT mRNA tarapyndan synag edildi we dürli täjirçilik ters transkriptazlar, DNK polimerazalary we RNK polimerazalary bilen utgaşdy.
Adam RNase inhibitorlary bilen deňeşdirilende, murin RNase inhibitory, inhibitoryň hereketsizleşmegine sebäp bolýan okislenmä ýokary duýgur iki sistini öz içine almaýar.DTT-iň pes konsentrasiýalarynda durnukly etmek (1 m-den az).Bu aýratynlyk, DTT-iň ýokary konsentrasiýasy reaksiýa garşy bolan reaksiýalarda ulanmak üçin amatly edýär (mysal üçin Real-time RT-PCR).
Aýalbarmak
Bu önüm, RNase päsgelçiliginiň RNK zaýalanmagynyň öňüni alyp boljak islendik synagda giňden ulanylyp bilner:
1.CDNA, RT-PCR, RT-qPCR we ş.m. birinji setiriň sintezi
2.In vitro transkripsiýa / terjime wagtynda (meselem, in vitro wirus köpeltmek ulgamy) RNK-nyň zaýalanmagyndan goraýar.
3.RNK bölünişi we arassalanmagy wagtynda RNase işjeňliginiň gadagan edilmegi.
Saklamak şertleri
Önüm -25 ～ - 15 at derejesinde saklanyp bilner, 2 ýyl ulanylýar.
Saklaýyş buferi
50 mM KCl, 20 m HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT we 50% gliserol.
Bölüm kesgitlemesi
Ribonukleýziň 5ng işjeňligini 50% saklamak üçin zerur bolan murin RNase inhibitorynyň mukdary bir birlik (U) hökmünde kesgitlenildi.
Belokyň molekulýar agramy
Murin RNase inhibitorynyň molekulýar agramy 50 kDa.
Hil barlagy
Exonuclease Iş:
40 μ U murin RNase inhibitory, 1 μg λ -Hind III siňdiriji DNK-ny 37 at 16 sagadyň dowamynda 16 sagatlap agarose gel elektroforezi bilen kesgitlenýän peselme bermeýär.
Endonukleýiň işi:
40 μ U murin RNase inhibitory, 1μ g λ DNK bilen 37 at 16 sagatda 16 sagatlap agarose gel elektroforezi bilen kesgitlenişi ýaly hiç hili peselme bermeýär.
Niklemek Iş:
40U murin RNase inhibitory, 1μ g pBR322 bilen 37 at 16 sagatda 16 sagatlap agarose gel elektroforezi bilen kesgitlenişi ýaly hiç hili peselme bermeýär.
RNase Iş:
37U-da 4h üçin 1,6μ g MS2 RNA bilen 40U murin RNase inhibitory, agarose gel elektroforezi bilen kesgitlenişi ýaly hiç hili peselme bermeýär.
E.coli DNK:
40 U murin RNase inhibitory, E. coli 16S rRNA ýerleşýän ýeri üçin ýörite TaqMan qPCR ulanyp, E. coli genom DNK-nyň barlygy üçin barlanýar.E. coli genom DNK bilen hapalanmagy ≤ 0,1 pg / 40 U.
Notes
1. Güýçli yrgyldama ýa-da garyşdyrmak fermentiň hereketsiz bolmagyna getirer.
2.Bu inhibitoryň iň amatly temperatura diapazony 25-55 was bolup, 65 ℃ we ondan ýokary derejede hereketsiz galdy.
3. RNase H, RNase 1 we RNase T1-iň işi murin RNase inhibitory tarapyndan saklanmady.
4. RNase işjeňliginiň gadagan edilmegi pH-iň giň diapazonynda tapyldy (pH 5-9 hemmesi işjeňdi) we iň ýokary işjeňlik pH 7-8 derejesinde hasaba alyndy.
5.Ribonukleazlar, adatça denatirleme şertlerinde işjeňligini saklaýandygy sebäpli, ribonukleý bilen çylşyrymly RNase Inhibitor molekulalaryny denatirlemezlik üçin seresap bolmaly.Işjeň ribonukleýiň bölünip çykmagynyň öňüni almak üçin, 50 ° C-den ýokary temperatura we karbamid ýa-da beýleki denatirleýji serişdeleriň ýokary konsentrasiýasyndan gaça durmaly.
