Hotstart Taq DNK polimeraza
“Hot Start Taq DNA polimeraza” (Antikor modifikasiýasy), 5 ′ → 3 ′ polimeraza we 5´ flap endonukleýz işjeňligine eýe bolan Termus suw YT-1 from gyzgyn başlangyç termostable DNK polimerazasydyr.Gyzgyn başlangyç Taq DNK polimerazy, termolabile Taq antikorlary tarapyndan üýtgedilen Taq DNK polimerazasydyr.Antikorlary üýtgetmek PCR-iň aýratynlygyny, duýgurlygyny we öndürijiligini ýokarlandyrdy.
Komponentler
| Komponent | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5 × HC Taq buferi | 4 × 1 ml | 4 × 10 ml | 4 × 50 ml | 5 × 400 ml |
| “Hot Start Taq” DNK polimeraza (Antikor üýtgedildi) (5 U / μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10 × 5 ml |
Goýmalar
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 25 ℃), 100 mM KCl, 0,1 m EDTA, 1 m dithiotreitol, 0,5% T20, 0,5% IGEPALCA-630 we 50% Gliserol.
Saklamak ýagdaýy
0 ° C-den pes transport we -25 ° C ~ -15 ° C derejesinde saklanar.
Bölüm kesgitlemesi
Bir birlik, 15 nmol dNTP-ni kislotanyň eräp bilmeýän materialyna 30 minutda 75 ° C-e goşýan fermentiň mukdary hökmünde kesgitlenýär.
Hil barlagy
1.Endişjeňlik:4 μg pUC19 DNK bilen 20 U fermentiň 4 at 37 sagatda inkubasiýa edilmegi, gel elektroforezi bilen kesgitlenýän DNK-nyň hiç hili bozulmagyna getirmedi.
2.5 kb Lambda PCR:200 µM dNTP we 0,2 µM primer bar bolan 1,25 birlik Taq DNK polimerazasy bilen 5 ng Lambda DNK-ny PCR güýçlendirmek sikli, garaşylýan 5 kb önümiň netijesini berýär.
3.Exonuclease işjeňligi:Iň azyndan 12.5 U Taq DNK polimerazyny öz içine alýan 50 µl reaksiýanyň 10 nmol 5´-FAM oligonukleotid bilen 30 at 37 minutda inkubasiýa edilip bilinýän bozulma bermeýär.
4.RNase işjeňligi:37 ° C-de 2 sagatlap 1 μg RNK transkripsiýasy bolan 20 U fermenti öz içine alýan 10 µL reaksiýanyň inkubasiýa edilmegi, gel elektroforezi bilen kesgitlenýän RNK-nyň peselmegine sebäp bolmady.
5.Atylylyk hereketsizligi:No.ok.
Reaksiýa ulgamy
| Komponentler | Ses |
| Şablon DNKa | islege bagly |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 μL |
| 10 μM ters primer | 0,5 μL |
| dNTP garyndysy (hersi 10mM) | 0,5 μL |
| 5 × HC Taq buferi | 5 μL |
| Taq DNK polimerazab(5U / μL) | 0.125 μL |
| Ucadrosyz suw | 25 μL çenli |
Bellikler:
1) a.
| DNK | Mukdary |
| Genom | 1 ng-1 μg |
| Plazmid ýa-da Wirus | 1 pg-1 ng |
2) b.Taq DNK polimerazynyň optimal konsentrasiýasy ýöriteleşdirilen programmalarda 5-50 birlik / ml (0,1-0,5 birlik / 25 µL reaksiýa) aralygynda bolup biler.
Malylylyk welosiped protokoly
PCR
| Stepdim | Temperatura(° C.) | Wagt | Sikller |
| Başlangyç denaturasiýaa | 95 ℃ | 1-3 minut | - |
| Denaturasiýa | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 aýlaw |
| Annealingb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Giňeldiş | 68 ℃ | 1kb / min | |
| Jemleýji giňeltme | 68 ℃ | 5min | - |
Bellikler:
1) Güýçlendirmek üçin 95 ° C-de 1 minut başlangyç denaturasiýa ýeterlikdir.Kyn şablonlar üçin, 95 ° C-den 2-3 minut has uzyn denatasiýa maslahat berilýär.Koloniýa PCR bilen, 95 ° C-de başlangyç 5minat denatasiýa maslahat berilýär.
2) Baglaýjy ädim adatça 15-60 s.Annealing temperaturasy başlangyç jübütiň Tm-e esaslanýar we adatça 45-68 is bolýar.
